Caratterizzazione di due batteriofagi litici, infettanti il ​​complesso Streptococcus bovis/equinus (SBSEC) da ruminante coreano

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Sep 07, 2023

Caratterizzazione di due batteriofagi litici, infettanti il ​​complesso Streptococcus bovis/equinus (SBSEC) da ruminante coreano

Scientific Reports volume 13,

Rapporti scientifici volume 13, numero articolo: 9110 (2023) Citare questo articolo

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Il complesso Streptococcus bovis/equinus (SBSEC) è uno dei più importanti batteri ruminali produttori di acido lattico che causa acidosi ruminale subacuta. Nonostante l'importanza dei batteri ruminali, i batteriofagi litici (fagi) capaci di infettare le SBSEC nel rumine sono stati raramente caratterizzati. Quindi, descriviamo le caratteristiche biologiche e genomiche di due fagi litici (designati come vB_SbRt-pBovineB21 e vB_SbRt-pBovineS21) che infettano varie specie SBSEC, inclusa la S. ruminicola appena segnalata. I fagi SBSEC isolati erano morfologicamente simili ai Podoviridae e potevano infettare altri generi di batteri produttori di acido lattico, tra cui Lactococcus e Lactobacillus. Inoltre, hanno mostrato un’elevata stabilità termica e del pH e tali caratteristiche inducono un forte adattamento all’ambiente ruminale, come il basso pH riscontrato nell’acidosi ruminale subacuta. La filogenesi basata sul genoma ha rivelato che entrambi i fagi erano correlati allo Streptococcus fago C1 nel Fischettivirus. Tuttavia, avevano una somiglianza nucleotidica inferiore e disposizioni genomiche distinte rispetto al fago C1. L'attività batteriolitica dei fagi è stata valutata utilizzando S. ruminicola e i fagi hanno inibito efficacemente la crescita batterica planctonica. Inoltre, entrambi i fagi potrebbero prevenire la formazione di biofilm batterici di vari ceppi SBSEC e di altri batteri produttori di acido lattico in vitro. Pertanto, i due fagi SBSEC appena isolati sono stati classificati come nuovi membri del Fischettivirus e potrebbero essere considerati potenziali agenti di biocontrollo contro i batteri SBSEC ruminali e i loro biofilm.

Il complesso Streptococcus bovis/Streptococcus equinus (SBSEC) è un gruppo batterico commensale presente nel tratto gastrointestinale dell'uomo e degli animali domestici, tra cui mucche, capre e cavalli1. Il gruppo SBSEC è stato classificato in base alle caratteristiche fenotipiche delle specie, tra cui Streptococcus (S.) equinus (sinonimo di S. bovis), S. gallolyticus subsp. galloyticus, S. gallolyticus subsp. pasteurianus, S. gallolyticus subsp. macedonicus, S. infantarius subsp. infantarius, S. lutetiensis e S. alactolyticus2. Recentemente, una nuova specie, S. ruminicola, isolata da ruminanti nella Corea del Sud, è stata proposta come nuovo membro con proprietà biologiche distinte tra i ceppi di questo gruppo3. Le (sotto)specie specifiche della SBSEC hanno causato infezioni cliniche, come l'endocardite infettiva e la batteriemia con cancro del colon-retto. Sono inoltre coinvolti nei disordini metabolici degli animali, come l'acidosi ruminale subacuta nei ruminanti4,5,6, indicando così l'importanza di questo gruppo come potenziali agenti patogeni.

I batteriofagi (fagi) infettano naturalmente i batteri attraverso due cicli di replicazione (litico e lisogenico) e hanno un targeting per l'ospite altamente specifico, evitando disturbi nella comunità del microbioma7. Gli attributi unici dei fagi li rendono potenziali antimicrobici per il controllo selettivo di diversi batteri patogeni. Il biofilm batterico costituito da sostanze polimeriche extracellulari è altamente resistente agli antibiotici, al calore e alle condizioni acide, con conseguente aumento dei batteri resistenti agli antimicrobici nelle comunità abiotiche e biotiche8. È stato segnalato che i fagi controllano la formazione del biofilm e penetrano nel biofilm esistente sulle superfici delle cellule planctoniche9. Nel rumine sono state trovate circa 108 popolazioni di particelle per grammo di contenuto ruminale10, ma si sa poco in termini di proprietà biologiche della maggior parte dei fagi in ambienti di coltivazione rigorosi. Fino ad ora, 14 fagi che infettano Streptococcus spp. sono stati tassonomicamente approvati dal Comitato internazionale per la tassonomia dei virus (ICTV; https://ictv.global/taxonomy) e circa 800 genomi completamente sequenziati, inclusi i fagi di Streptococcus, sono disponibili nel database GenBank. Tuttavia, gli studi sui fagi che infettano SBSEC sono relativamente più scarsi di quelli di altri Streptococcus sp. nonostante l’importanza dei batteri ruminali. Solo un genoma dell'isolato fagico SBSEC ϕSb01, con morfotipi della famiglia Siphoviridae, è attualmente disponibile nel Joint Genome Institute Genome Portal11.

 33% and predicted 27 and 26 open reading frames (ORFs), respectively. The genome maps are shown in Fig. 5a and Fig. 5b. In both phages, 10 ORFs were predicted as functional proteins, including encapsidation protein, DNA polymerase, putative lysis system-associated proteins, phage tail protein, tail fiber protein, head-to-tail adapter, upper collar protein, and major capsid protein. Additionally, 13 conserved domains were detected in functionally predicted ORFs based on homology comparisons of phage-originated proteins. Over 10 ORFs in phages vB_SbRt-pBovineB21 and vB_SbRt-pBovineS21 were similar (amino acid identities; 25.5–63.6%) to the predicted proteins from Streptococcus phage C119. In addition, over four ORFs were similar (amino acid identities < 45%) to other Podoviridae phages available in the GenBank database, indicating that isolated SBSEC phages possess unique genomic structures. The remaining ORFs were predicted as hypothetical proteins, with unknown proteins annotated using BLASTP searches. Additionally, transmembrane domains were predicted in three ORFs and no signal peptide was predicted in all the ORFs of both phages (Supplementary Tables 1 and 2). tRNA genes and bacterial virulence- and antimicrobial resistance-associated genes were not detected in the genomes of both the isolated phages. The PhageTerm analysis was predicted to be permuted with redundant ends in the isolated phages. Particularly, the genomes of phages vB_SbRt-pBovineB21 and vB_SbRt-pBovineS21 had high similarities to 18 predicted ORFs, and 13 putative functional proteins divided into four functional groups: two nucleotide metabolisms, four viral structure and packaging, four lysis, and three tail structures. However, both phages distinctly differed in the genes present in the intergenic regions between ORF 13 and ORF 15. In phage vB_SbRt-pBovineS21, ORF 14 (171 bp) and ORF 15 (232 bp) were located next to ORF 13, encoding a tail protein of 583 bp in a row; however, the ORF 14 presented in phage vB_SbRt-pBovineS21 was not detected in phage vB_SbRt-pBovineB21 (Fig. 6)./p>